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　　人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)

　　實(shí)驗(yàn)原理:

　　本試劑盒應(yīng)用雙夾心法測(cè)定標(biāo)本中Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)水平。用純化的Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)捕獲包被微孔板,制成固相,往包被的微孔中依次加入Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP),再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)結(jié)合,形成-抗原-酶標(biāo)復(fù)合物,經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)含量。

　　樣品采集:

　　收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20℃可保存凝血因子IXELISA試劑盒

　　自備物品:

　　1 、 37 ℃ 恒溫箱

　　2 、 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

　　3 、 精密移液器及一次性吸頭

　　4 、 蒸餾水

　　5 、 一次性試管

　　6 、 吸水紙

　　人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)樣本處理及要求:

　　1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

　　2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

　　3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

　　4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

　　5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

　　6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

　　7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。